Diagnostics molekular: real-time PCR

Ayeuna, mékanisme diagnostics molekular dirancang réaksi ranté polimérase (PCR), nu ieu impetus pikeun ngembangkeun angka nu gede ngarupakeun métode diagnosis kasakit, dumasar tekad tina bahan genetik. Pikeun mawa kaluar real-time PCR maké sempalan gén (hususna dina asam nukléat) ti agén sabab, anu teu kapanggih dina individu séjén.

Prinsip PCR teh multiplication of a jutaan DNA patogén sempalan tangtu kali ku polimérase DNA dina Unit husus, disebut salaku cycler termal, nu nyadiakeun pengulangan siklik tina rezim hawa pikeun program dibikeun.

Diagnostics PCR ngamungkinkeun pikeun ngulang runtuyan amplifications, ngajaga aktivitas énzim. Nalika Gedekeun téh lumangsung lancar, dina hiji siklus jumlah salinan sapotong tinangtu DNA tina rangkep patogén, sanggeus tilu puluh siklus - saratus jeung sapuluh. Éta pisan sababna naha PCR dipaké dina diagnosis nangtukeun patogén cukup leutik, idéntifikasi nu sahiji nu teu mungkin tanpa eta.

Ieu kudu dicatet yén RNA teu tiasa janten template pikeun PCR sacara real waktu. Ku alatan éta, ambéh ngadeteksi RNA viral saméméh Gedekeun nu meunang DNA correlated jeung sempalan saluyu tina eta. Réaksi ranté polimérase ngamungkinkeun pikeun ngahasilkeun DNA jeung RNA ukur patogén. Informasi sahingga diala dipaké pikeun mantau efektivitas terapi dipaké, sarta evaluasi tina ramalan klinis.

Sajaba ti éta, real-time PCR teu merlukeun tindakan tambahan kalayan hormat ka nyah tina DNA udagan atawa amplicons, anu ngawula ka salaku panghalang kana diagnosis nu bener tur ngakibatkeun hasil palsu. pendekatan ieu ngamungkinkeun teu nganggo hambalan Éléktroforésis, anu ngabalukarkeun hiji produk resiko-réduksi tina réaksi ranté polimérase. Ogé, alatan nu panurunan dina Jumlah Manipulasi kalawan ngajén, ngurangan waktu survey, eta simplifies prosesna, ngurangan likelihood tina kasalahan. PCR ogé ngidinan Anjeun pikeun nangtukeun jumlah awal salinan DNA tina patogén dina hiji sidang klinis pikeun mantuan ngaidentipikasi période exacerbations sarta nyandak ukuran timely cageur sabar.

Dinten, aya angka nu gede ngarupakeun métode Gedekeun of fiksasi sacara real waktu. Rupa-rupa téhnik nu dipaké nerapkeun amplicon correlated kalawan panyilidikan fluorogenic, inténsitas radiasi anu beda- beda tergantung kana akumulasi amplicon sarta dirékam sacara real waktos ku cara maké hiji alat husus disebut thermocycler kalawan modul optik. Eta nyadiakeun tingkat luhur sensitipitas tina hasil analisis. Di produk PCR sami bisa ditandaan marengan kuantitas badag tina ku-produk, dina hiji waktu lamun ngagunakeun Éléktroforésis eta dina sababaraha kasus henteu noticed.

Ku PCR ngagunakeun sampel kontrol positif jeung negatif sacara real waktu. Ku kituna, sampel positif jeung negatif dina ulikan a dianalisis salaku sampel misah, sampel kontrol wherein ieu diwanohkeun dina tiap sample sapertos na pas kabeh léngkah analisis.

Dinten, aya angka nu gede ngarupakeun alat pikeun mawa kaluar dina réaksi ranté polimérase. Ieu kaasup Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid na Roche. Tiap di antarana boga kaunggulan jeung kalemahan

Ieu kudu dicatet yén PCR - metoda diagnosis dipaké dina badag skala ilmiah, panalungtikan sarta puseur diagnostik sakuliah dunya, sabab méré kasempetan pikeun ngalakonan interpretasi saharita tina hasil.